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單株抗體的製備步驟

單株抗體的製備步驟

1、免疫動物

免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產生致敏B淋巴細胞的過程;

2、細胞融合

採用眼球摘除放血法處死小鼠,無菌操作取出脾臟,在平皿內擠壓研磨,製備脾細胞懸液。 將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合,並加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發生融合,形成雜交瘤細胞;

3、選擇性培養

選擇性培養的目的是篩選融合的雜交瘤細胞,一般採用HAT選擇性培養基;

4、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化

採用靈敏、快速、特異的免疫學方法,篩選出能產生所需單株抗體的陽性雜交瘤細胞,並進行克隆擴增;

5、單株抗體的大量製備

單株抗體的大量製備一般採用動物體內誘生法和體外培養法。

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